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EZsep™ AFB&G免疫親和柱用于玉米中黃曲霉毒素B族的檢測

更新時(shí)間:2024-06-25       點(diǎn)擊次數:150

前言:

黃曲霉毒素B1(Aflatoxin B1,簡(jiǎn)寫(xiě)為AFB1)是已知的化學(xué)物質(zhì)中致癌性非常強的一種,對人和動(dòng)物具有強烈的毒性,其毒性作用主要是對肝臟的損害。

黃曲霉毒素B1存在于土壤,動(dòng)植物各種堅果,特別是花生和核桃中。在大豆、稻谷、玉米、通心粉、調味品、牛奶、奶制品、食用油等制品中也經(jīng)常發(fā)現黃曲霉毒素。一般以熱帶和亞熱帶等南方高溫、高濕地區受污染最為嚴重,食品中黃曲霉毒素的檢出率比較高。黃曲霉毒素耐熱,280℃才可裂解,故一般烹調加工溫度下難以被破壞。國家質(zhì)檢總局規定黃曲霉毒素B1是大部分食品的必檢項目之一。

本文參考《GB 5009.22-2016 食品安全國家標準 食品中黃曲霉毒素B族和G族的測定 第三法為高效液相色譜-柱后衍生法》,利用EZsepTM AFB&G免疫親和柱(3mL,20/pk,貨號:PZ24102)凈化樣品,再通過(guò)高效液相色譜儀進(jìn)行檢測,建立了一種玉米中黃曲霉毒素B族的分析方法。

 

關(guān)鍵詞:

黃曲霉毒素B族免疫親和,高效液相色譜

 

1 實(shí)驗過(guò)程

1.1 儀器與試劑

SPE1000全自動(dòng)固相萃取系統,北京萊伯泰科儀器股份有限公司;

LC600二元高壓梯度高效液相色譜(北京萊伯泰科儀器股份有限公司)配光化學(xué)衍生器;

E.T.氮吹濃縮儀(貨號:C020017),北京萊伯帕茲檢測科技有限公司

冷凍離心機,GL-20G-Ⅱ,上海安亭科學(xué)儀器廠(chǎng);

EZsepTM AFB&G免疫親和柱(3mL,20/pk,貨號:PZ24102),北京萊伯帕茲檢測科技有限公司

甲醇(色譜純),購自賽默飛世爾科技(中國)有限公司;

乙腈(色譜純),購自賽默飛世爾科技(中國)有限公司;

超純水;

0.1%吐溫-水:1mL的吐溫-20,加水定容至1L

1.2 工作液配制

乙腈中4種黃曲霉毒素混標儲備液:1.0μg/mL,壇墨質(zhì)檢 。

黃曲霉毒素混標中間液:移取黃曲霉毒素混標儲備液1mL,用甲醇稀釋至10mL容量瓶中,配制成濃度為100ng/mL的中間液。

黃曲霉毒素混標工作液:移取黃曲霉毒素混標中間液1mL,用甲醇稀釋至10mL容量瓶中,配制成濃度為10ng/mL的工作液。

分別移取100ng/mL黃曲霉毒素混標中間液10μL、50μL、200μL、500μL、1 000μL至10 mL容量瓶中,用初始流動(dòng)相定容至刻度,得到濃度依次為0.1 ng/mL、0.5 ng/ml、2.0 ng/ml、5.0 ng/mL、10.0 ng/mL的標準工作溶液

 

1.3 實(shí)驗部分

1.3.1 樣品制備

 稱(chēng)取5g玉米試樣(精確至0.01g)于50mL離心管中,加入20.0mL甲醇-水溶液(70+30),渦旋混勻,用均質(zhì)器10000r/min上下震蕩均質(zhì)3 min,在6000r/min下離心20min。準確移取4mL上清液,加入46mL0.1%吐溫-,混勻,待凈化。

1.3.2 凈化與濃縮

將低溫保存的EZsepTM AFB&G免疫親和柱(3mL,20/pk,北京萊伯帕茲檢測科技有限公司貨號:PZ24102恢復至室溫,待免疫親和柱內原有液體流盡后移取上述凈化液上樣,上樣結束后20mL2淋洗萃取柱,之后在真空狀態(tài)下干燥1min最后用2mL甲醇洗脫洗脫液40下氮吹濃縮至近干,再用流動(dòng)相定容至1 mL渦旋混勻,0.22μm濾膜過(guò)濾,待檢測

1.3.3 高效液相色譜檢測條件

色譜柱:Promosil C185μm,4.6*250mm

波長(cháng)激發(fā)波長(cháng)360nm,發(fā)射波長(cháng)440nm

流速1.0mL/min

40℃

進(jìn)樣量20μL

流動(dòng)相超純水:甲醇+乙腈(50+50)=68:32

2 實(shí)驗結果

 

1 標準樣品色譜

 

2 加標樣品色譜

 

3空白樣品色譜

3 結論 

本實(shí)驗使用EZsepTM AFB&G免疫親和柱(3mL,20/pk,北京萊伯帕茲檢測科技有限公司貨號:PZ24102玉米黃曲霉毒素B族進(jìn)行凈化后通過(guò)高效液相色譜儀進(jìn)行檢測,該方法的加標回收率在81.1%~93.2%之間RSD2.2%~2.7%之間。回收率和穩定性滿(mǎn)足標準要求,說(shuō)明EZsepTM AFB&G免疫親和柱能很好的完成方法中的凈化工作,并且結果穩定、可靠。

4 參考文獻

[1] GB 5009.22-2016 食品安全國家標準 食品中黃曲霉毒素B族和G族的測定 第三法高效液相色譜-柱后衍生法


1  加標回收率

基質(zhì)

黃曲霉毒素

添加量

μg/kg)

回收率(%)

平均值(%)

RSD(%)

玉米

B1

0.1

83.2

85.1

86.3

81.1

83.9

2.7

B2

0.1

91.8

90.9

93.2

88.5

91.1

2.2

 

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